scRNA-seq应用于癌症诊疗的基本流程包括:1)单细胞分选 -> 2)文库构建 -> 3)测序及分析。目前测序技术相对成熟,更多集中在速度、通量和成本上的优化。而众多研究显示,第一个单细胞分选环节对结果影响较大。我们今天就来看看单细胞分选环节中主流的技术路径和其优劣势对比。
从上表的对比中,我们可以看到,绝大部分的分选方式对细胞的损伤都是比较剧烈的,这是因为在分选过程引入了较多的机械应力。比如,我们在磁珠分选过程中细胞要经过分离柱的挤压和离心洗涤中的高转速,这些外部压力不仅会显著降低细胞活性,还会严重影响最终的细胞得率。而现在更多的创新细胞分选方法,比如LeviCell™平台则是采用了液相磁悬浮的方式,在1psi的正常压力值下进行细胞分选,确保细胞的得率和活性能处于双高的状态(如下图二所示)。
图二 使用LeviCell™平台进行PBMC样本的活细胞富集。结果显示LeviCell™可以把起始样本的活性提高到90%左右,同时保证平均的细胞得率在70%左右。
为了提高液相磁悬浮细胞分选的产品适用性,全面提升科研人员多细胞分析的效率,LeviCell™的研发人员开发了一系列的LeviSelect™试剂盒,让该平台不仅可以实现基础的活细胞富集,还可以同时分选多种细胞亚型,以适应不同研究项目的需求。
以癌症相关研究为例,常用的试剂盒就包括了LeviSelect™ Human CD45 Depletion Kit来去除样本中的白细胞,或者LeviSelect™ Human CD3 T Cell Enrichment Kit来研究肿瘤组织中的驻留T细胞。
图三 LeviCell™仪器结合LeviSelect™分选磁珠可以适应更多细胞亚群研究的项目需求。
图四 搭配LeviSelect™试剂,LeviCell™平台现在可以实现一步法获得高活率、高得率的目的细胞。
传统细胞分选方法往往伴随不连续的、多步骤的、巨大环境压力的过程,这样获得的细胞质量差强人意,成为制约精准诊疗发展的重要瓶颈。LeviCell™平台和其搭配分选试剂的上市将这个难题化繁为简,用整体化、一步法的方式完成死细胞去除、碎片清理和细胞亚群的分选,开启样本表征和处理新时代。最后我们以LeviSelect™ Human CD3 T Cell Enrichment Kit为例来展示一下LeviCell™平台在分选细胞亚群上的卓越效果。
图五 左图是在使用LeviCell™ 1.0平台之前的人CD3 T细胞,右图是分选之后的流式分析图。结果显示,2x106人PBMC上样后,CD3 T细胞的比例从53.63%提升到了98.36%。
Cancer Communications. 2020;40:329–344.
力微拓(上海)生命科学有限公司是塞力斯医疗科技集团股份有限公司(603716.SH)与美国LevitasBio™在中国上海设立的集研发、生产、分销、市场推广、应用支持及售后服务为一体的合资公司,致力于将目前全球炙手可热的单细胞分析市场中的领先技术——美国LevitasBio™所独创的细胞分离、分选、富集系统LeviCell™引入中国。
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